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目前经典lc主要用于制备,若用于分析则采用脱机或非连续检测。经典lc填料缺陷,通常是填料粒度大、范围宽、不规则、不易填充均匀、扩散和传质阻力大,谱带展宽加大。它存在致命弱点:速度慢、效率低和灵敏度低。hplc填料(高效固定相)颗粒细,直径范围窄,能承受高压。达到传质阻力小,分离效率高。早期hplc的固定相用涂渍的方法制备,液膜厚度df大,这和gc一样,会大大降低色谱柱的柱效。
现代hplc填料大多采用键合固定相,其固定相膜很薄,因而大大提高了柱效。高效固定相会带来什么新问题呢?使用高效填料带来两个新问题:一是柱流动阻力大大增大,因此需要采用高压泵输液;二是表面能很大,要采用专业的装柱技术。高效液相色谱法是在气相色谱和经典液相色谱的基础上发展起来的。现代液相色谱和经典液相色谱没有本质的区别。
不同点仅仅是现代液相色谱比经典液相色谱有较高的效率和实现了自动化操作。高效液相色谱的原理与经典液相色谱相同,但是它采用了高效色谱柱,高压输液泵和高灵敏度检测器。因此，高效液相色谱的分离效率,分析速度和灵敏度大大提高。定量准确,达到可与gc相媲美的分离分析性能。
特别是结合计算机技术,hplc已成为高度自动化和智能化的现代分析仪器。经典的液相色谱法,流动相在常压下输送,所用的固定相柱效低,分析周期长例如柱长170㎝,柱内径0.9㎝,流动相速度30㎝3/h,约需20多小时才能分离出20种氨氨ji酸;而用高效液相色谱法,只需1小时之内就完成。
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